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        Aldehyde-activated SepFast系列產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

         更新時(shí)間:2023-04-10    點(diǎn)擊量:922

        活化瓊脂糖基質(zhì)在制備和使用定制親和層析介質(zhì)方面具有良好的記錄。將生物特異性配體與醛活化瓊脂糖偶聯(lián)是一項(xiàng)成功且有據(jù)可查的技術(shù)。

        Aldehyde-activated SepFast通過(guò)還原胺化反應(yīng)與含有伯胺基團(tuán)的配體形成化學(xué)穩(wěn)定的仲胺鍵。這種預(yù)活化的瓊脂糖基質(zhì)可用于親和層析介質(zhì)的定制,適用于小規(guī)模和大規(guī)模純化應(yīng)用。

        醛基.png

         

        1. 屬性

        2種基質(zhì)可供選擇,適合各種待偶聯(lián)或純化的分子。

        • Aldehyde-activated SepFast 4 High Flow (4HF) 由高度交聯(lián)的4%珠狀瓊脂糖組成。其大孔徑適用于偶聯(lián)或純化大分子。它具有高機(jī)械剛度,可在降低背壓的情況下實(shí)現(xiàn)高流量。

        • Aldehyde-activated SepFast 6 High Flow (6HF) 由高度交聯(lián)的6%珠狀瓊脂糖組成。其適中的孔徑適用于偶聯(lián)較小的分子。它也具有高機(jī)械剛度可在降低背壓的情況下實(shí)現(xiàn)高流量。

        由于瓊脂糖具有出色的親水性和低非特異性結(jié)合特性,長(zhǎng)期以來(lái)一直用于色譜分離。這些顆粒具有開(kāi)孔結(jié)構(gòu),對(duì)各種分子具有出色的傳質(zhì)性能。基質(zhì)通過(guò)氧化被激活以產(chǎn)生醛基它直接與分子中的伯胺基反應(yīng),在還原劑存在的情況下被固定化。

        Aldehyde-activated SepFast20%乙醇中的水懸浮液形式提供。

        1  Aldehyde-activated SepFast 4HF/6HF的特性

        可耦聯(lián)基團(tuán)

        -NH2

        基質(zhì)

        SepFast 4HF:高度交聯(lián)的4%瓊脂糖

        SepFast 6HF:高度交聯(lián)的6%瓊脂糖

        粒徑

        50-150 μm

        活化水平

        > 5 μmol aldehyde /ml medium

        pH穩(wěn)定性

        3-13(具有配體依賴性)

        化學(xué)穩(wěn)定性

        對(duì)偶聯(lián)配體能夠接受的所有常用的水性化學(xué)品穩(wěn)定

        保存

        4-8

        2. 配體固定化

        以下是一般的配體偶聯(lián)程序。

        2.1  將目標(biāo)配體溶解在偶聯(lián)緩沖液中,0.1 M磷酸鈉pH 7.0。一般對(duì)于蛋白質(zhì)配體,凝膠的制備濃度為5 - 20 mg/ml。對(duì)于配體,凝膠的制備濃度為10 - 100  µmol/ml。偶聯(lián)緩沖液的體積可以固定凝膠體積一半或相同

        2.2  在過(guò)濾裝置中用至少倍體積的偶聯(lián)緩沖液清洗醛活化凝膠。

        2.3  將洗凈并吸干的凝膠(來(lái)自步驟  2.2)轉(zhuǎn)移到步驟  2.1 制備的溶液中。

        如果發(fā)生變化,請(qǐng)調(diào)整 pH 值。

        2.4  將漿液在通風(fēng)良好的通風(fēng)櫥中在室溫下混合 2?4 小時(shí)。

        2.5  將氰基硼QING化鈉(0.5 g/100 ml  活性凝膠)加入漿液中過(guò)夜。注意:氰基硼QING化鈉有毒,應(yīng)格外小心處理。

        2.6  用至少 5 倍凝膠體積的偶聯(lián)緩沖液清洗凝膠。

        2.7 在氰基硼QING化鈉存在下,將凝膠重新懸浮到相同體積的封閉溶液,0.1 M Tris/HClpH 8.01 M乙醇胺pH 8.02-3小時(shí)。

        2.8 5倍體積的0.1 M Tris/HCl + 1 M NaClpH 8.0 洗滌凝膠,然后用5倍體積的0.1 M醋酸鹽緩沖液 + 1 M NaClpH 4.0洗滌凝膠。

        2.9 使用前用工作/平衡緩沖液清洗凝膠。

        3. 固定化效率的一般考慮

        3.1 pH

        還原胺化可以pH 4 - 10之間非常有效地進(jìn)行。但是可以優(yōu)化偶聯(lián)pH以獲得最佳結(jié)果(例如,高偶聯(lián)產(chǎn)率和高配體活性)。

        在配體溶解后要注意調(diào)整偶聯(lián) pH 值。

        3.2 偶聯(lián)方案

        應(yīng)避免使用含有氨基的溶液。

        可以引入稀釋的某些有機(jī)溶劑以提高配體的溶解度。應(yīng)事先測(cè)試此類溶劑的適用性。

        耦合溶液的體積與活化凝膠的體積保持一致。建議使用0.5-1 : 1 v/v的理想比例。

        3.3

        偶聯(lián)緩沖液中鹽的存在(例如0.5  M 或飽和)可以提固定效率。

        3.4 基礎(chǔ)基質(zhì)中的活化基團(tuán)

        對(duì)于某些配體或應(yīng)用,基礎(chǔ)基質(zhì)中的活化水平可能過(guò),偶聯(lián)配體的活性可能會(huì)降低。

        在降低的 pH 值下偶聯(lián)可能會(huì)減少配體分子的連接點(diǎn)。它可以提偶聯(lián)配體的活性。活化基團(tuán)的受控封閉,例如在添加配體前幾個(gè)小時(shí)用  5?10  mM  封閉緩沖液孵育凝膠,也可以減少過(guò)度偶聯(lián)問(wèn)題。

        3.5 反應(yīng)時(shí)間

        可以優(yōu)化偶聯(lián)過(guò)程中配體和活化介質(zhì)之間的接觸時(shí)間以保持配體的生物活性。

        3.6 還原劑的選擇

        其他還原劑如硼QING化鈉可用于偶聯(lián)反應(yīng)。氰基硼氫化物是一種較溫和的還原劑,它只還原醛基和伯胺基之間形成的中間席夫堿,得到穩(wěn)定的仲胺鍵。硼氫化物是一種更強(qiáng)的還原劑,可還原席夫堿和未偶聯(lián)的醛基。

        3.7 屏蔽剩余的活化配體

        未與配體反應(yīng)的活化基團(tuán)應(yīng)通過(guò)添加含有pH 8 - 9伯胺的額外小分子(例如 Tris 或乙醇胺)來(lái)封端。

        3.8 最終介質(zhì)的洗滌

        偶聯(lián)反應(yīng)后需要將未連接或弱連接的配體WAN全洗掉。采用高pH值和低pH值交替的洗滌方法可以確保有效去除不需要的物質(zhì)。

        4. 固定化親和介質(zhì)的使用

        配體偶聯(lián)介質(zhì)可用于使用間歇攪拌罐模式或填充柱模式的純化。處理這種材料遵循與處理其他基于瓊脂糖基質(zhì)相同的原則。

        5. 儲(chǔ)存

        Aldehyde-activated SepFast應(yīng)在8℃下儲(chǔ)存。偶聯(lián)的濕介質(zhì)應(yīng)在防菌劑(例如20%乙醇)存在的情況下于4-8℃儲(chǔ)存。切勿凍存耦合介質(zhì)。

        6. 更多信息

        了解更多關(guān)于BioToolomics產(chǎn)品聯(lián)系天津益元利康科技有限公司了解產(chǎn)品信息。 

        7. 訂購(gòu)信息

        產(chǎn)品

        規(guī)格

        貨號(hào)

        Aldehyde-activated

        SepFast 4HF

        5 mL

        340101-5ML

        50 mL

        340101-50ML

        1 L

        340101-1L

        Aldehyde-activated

        SepFast 6HF

        5 mL

        340104-5ML

        50 mL

        340104-50ML

        1 L

        340104-1L


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