細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中需要注意什么？

隨著基因和蛋白功能的深入研究，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為科研實(shí)驗(yàn)中最chang用的技術(shù)手段之一。那么在細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中需要注意什么呢？讓我們一起來看看吧！

一、轉(zhuǎn)染試劑

不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同，但細(xì)胞系的選擇通常是根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要，因此在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和細(xì)胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。

每種轉(zhuǎn)染試劑都會提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株列表和文獻(xiàn)，通過這些資料可選擇最shi合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的轉(zhuǎn)染試劑。

不同轉(zhuǎn)染試劑有不同的轉(zhuǎn)染方法，但大多大同小異。轉(zhuǎn)染時應(yīng)跟據(jù)具體轉(zhuǎn)染試劑推薦的方法，但也要注意，因不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的細(xì)胞性質(zhì)不同，質(zhì)粒定量差異，操作手法上的差異等，其轉(zhuǎn)染效果可能不同，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體條件來確定最佳轉(zhuǎn)染條件。

二、細(xì)胞狀態(tài)和密度

轉(zhuǎn)染前細(xì)胞的狀態(tài)和密度都非常影響轉(zhuǎn)染效率和后期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。最shi合轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是經(jīng)過幾次傳代后達(dá)到指數(shù)生長期的細(xì)胞，細(xì)胞生長旺盛，最容易轉(zhuǎn)染。

細(xì)胞狀態(tài)不好，會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低下，為確保良好的細(xì)胞狀態(tài)需注意以下幾點(diǎn)：

1.選擇傳代次數(shù)較低并處于對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

2.細(xì)胞密度（%匯合度）達(dá)到60%-80%時，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染，此時轉(zhuǎn)染效率較高。切勿讓細(xì)胞長到匯合狀態(tài)或過度生長。

3.同時注意在轉(zhuǎn)染后收細(xì)胞時的密度不要過爆。因?yàn)榧?xì)胞長的過爆嚴(yán)重影響細(xì)胞的狀態(tài)（周期進(jìn)程阻滯，凋亡增加等）從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。一般為前一天下午鋪板，第二天上午進(jìn)行轉(zhuǎn)染，48小時候收細(xì)胞進(jìn)行功能檢測。

三、使用優(yōu)質(zhì)DNA

DNA的質(zhì)量影響轉(zhuǎn)染效率：

1.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染基于電荷吸引原理，如果DNA的純度差，則其攜帶的少量的鹽離子、蛋白、代謝物污染都會顯著影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的有效形成及轉(zhuǎn)染的效率。

2.含有內(nèi)毒素的質(zhì)粒對細(xì)胞有很大的毒性作用。

3.為實(shí)現(xiàn)高效率、低毒性的轉(zhuǎn)染，應(yīng)使用高質(zhì)量的DNA（高純度、無菌、無內(nèi)毒素）。

4.使用無內(nèi)毒素的試劑盒和實(shí)驗(yàn)方案制備DNA；

5.通過測量OD值來確定DNA純度和濃度，OD 260/280 值應(yīng)介于1.7-1.9之間，越接近1.8越好。讀數(shù)小于1.8，表明樣品可能被芳香族產(chǎn)物（即苯酚）或蛋白質(zhì)污染；讀數(shù)大于2.0，則表明樣品被RNA污染。

6.當(dāng)轉(zhuǎn)染的DNA會編碼對細(xì)胞有毒害作用的產(chǎn)物時，可使用弱啟動子或可誘導(dǎo)的啟動子限zhi毒性基因產(chǎn)物表達(dá)對細(xì)胞造成的損害。

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