磁珠法提取DNA的實驗步驟與注意事項有什么？

　更新時間：2024-10-30 點擊量：3339

磁珠法核酸純化技術(shù)采用了納米級磁珠微珠，這種磁珠微珠的表面標(biāo)記了一種對核酸有吸附作用的特定活性官能團，能同核酸發(fā)生吸附反應(yīng)，從而達到核酸與雜質(zhì)分離的目的，進而獲得純化的核酸。那么磁珠法提取DNA的實驗步驟與注意事項有什么呢？讓我們一起來看看吧！

一、步驟

1、樣本處理：核酸必須從細(xì)胞或其他生物物質(zhì)中釋放出來。

（1）植物組織：液氮研磨或在特殊裂解液中電動勻漿；

（2）動物組織：液氮研磨或裂解液中手動/電動勻漿；

（3）血細(xì)胞：應(yīng)用紅細(xì)胞裂解液處理；

（4）細(xì)胞：胰酶處理或蛋白酶K處理。

2、DNA純化：磁珠提前30min從冰箱拿出平衡。磁珠振蕩混勻，取處理完成的裂解液50μl中加入50μl磁珠懸液，按1:1充分混勻，室溫靜置5min，將懸濁液安放在磁力架上，靜置5min至上清清澈，去上清，用75%乙醇或80%乙醇200μl清洗沉淀（現(xiàn)用現(xiàn)配），旋轉(zhuǎn)ep管靜置30s，棄上清。重復(fù)清洗2次，干燥5~10min。

3、DNA溶出：待磁珠無乙醇味，從磁力架上取下ep管，用dH2O或TE溶出DNA，充分混勻，勿用槍頭刮蹭磁珠。靜置2min。再將ep管安放在磁力架上，上清清澈后吸取上清至新的ep管，即可得到DNA溶液。

二、注意事項

1.適用于大多數(shù)動植物組織及培養(yǎng)細(xì)胞、全血、尤其適用于微量樣品的DNA提取，但對于裂解液過于粘稠的樣品不適用。