二代測(cè)序（NGS）的原理

　　DNA測(cè)序技術(shù)一直是分子生物學(xué)相關(guān)研究中常用的技術(shù)手段之一，從一定程度上推動(dòng)了該領(lǐng)域的快速發(fā)展。每一代測(cè)序技術(shù)的更替都標(biāo)志著生物學(xué)中基因芯片、數(shù)據(jù)分析、表面化學(xué)、生物工程等技術(shù)領(lǐng)域有了新的突破，使測(cè)序向著高通量、低成本、高安全性和商業(yè)化的方向發(fā)展。那么二代測(cè)序(NGS)的原理是什么？讓我們一起來看看吧！
 

　　第二代測(cè)序(NGS)又稱為高通量測(cè)序(High-throughputsequencing)，是基于PCR和基因芯片發(fā)展而來的DNA測(cè)序技術(shù)。二代測(cè)序引入了可逆終止末端，從而實(shí)現(xiàn)邊合成邊測(cè)序。二代測(cè)序在DNA復(fù)制過程中通過捕捉新添加的堿基所攜帶的特殊標(biāo)記來確定DNA的序列。由于在二代測(cè)序中，單個(gè)DNA分子必須擴(kuò)增成由相同DNA組成的基因簇，然后進(jìn)行同步復(fù)制，來增強(qiáng)熒光信號(hào)強(qiáng)度從而讀出DNA序列；而隨著讀長(zhǎng)增長(zhǎng)，基因簇復(fù)制的協(xié)同性降低，導(dǎo)致堿基測(cè)序質(zhì)量下降，這嚴(yán)格限制了二代測(cè)序的讀長(zhǎng)，因此，二代測(cè)序具有通量高、讀長(zhǎng)短的特點(diǎn)。
 

　　NGS技術(shù)因其高效和低廉的單堿基測(cè)序成本為臨床應(yīng)用提供了不可估量的前景優(yōu)勢(shì)，尤具相對(duì)傳統(tǒng)的Sanger測(cè)序法其每次產(chǎn)生的數(shù)據(jù)量幾乎是天文數(shù)字，加之信息科學(xué)的持續(xù)發(fā)展，使得對(duì)這樣的大數(shù)據(jù)進(jìn)行有效的處理已成為現(xiàn)實(shí)。目前NGS技術(shù)已應(yīng)用在分子診斷、遺傳分析、病原物生物等方面。
 

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