如何選擇緩沖溶液？

三羥甲基氨基甲烷（Tris）是一種應用非常廣泛的有機試劑。它及其衍生物被廣泛應用于生物化學和分子生物學實驗中的緩沖液的制備，可用于制作藥物、有機合成、生物緩沖劑等。其中在生化實驗中，許多蛋白質(zhì)及核酸相關的實驗都需要用Tris作為生物緩沖劑。那么你知道該如何選擇緩沖溶液嗎？讓我們一起來看看吧！

TBS即Tris緩沖鹽水，是Tris-HCl緩沖鹽溶液，為等滲鹽溶液加Tris-HCl緩沖液。因為Tris堿的堿性較強，所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液；對生物化學過程干擾很小，不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。

但是緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大，溫度效應也大，而且易吸收空氣中的CO2，所以配制的緩沖液要蓋嚴密封，此緩沖液對某些pH電極發(fā)生一定的干擾作用，所以要使用與Tris溶液具有兼容性的電極。

TBST緩沖液 TBST中含有Tris-HCl，NaCl，tween20這三種物質(zhì)，是做Western Blotting中常用的一種洗膜緩沖液。目的是洗掉非特異性吸附的蛋白質(zhì)，并且維持一個接近的天然環(huán)境。其中，Tween是一種離子表面活性劑，可加速抗體非特異性結合的分離。因為Western Blotting中所用的膜可以與蛋白質(zhì)結合，孵育過程中，抗體能夠與膜非特異性結合。為了防止以后曝光造成膠片背景太高，在孵育抗體后，混有Tween 20的TBS 能夠?qū)⒎翘禺愋越Y合的抗體洗掉，增加特異性。

TE緩沖液 Tris鹽酸緩沖液中加入EDTA制成“TE緩沖液"，TE緩沖液是弱堿性，對DNA的堿基有保護性，因此，DNA在TE中的穩(wěn)定性較好，不易被破壞完整性或產(chǎn)生開環(huán)及斷裂，TE緩沖液被用于DNA的穩(wěn)定和儲存。

將調(diào)節(jié)pH值的酸溶液換成乙酸，則獲得“TAE緩沖液"（Tris/Acetate/EDTA），TAE是使用zui廣泛的緩沖系統(tǒng)。其特點是超螺旋在其中電泳時更符合實際相對分子質(zhì)量，且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率也較快，電泳大于13kb的片段時用TAE緩沖液將取得更好的分離效果。此外，回收DNA片段時也易用TAE緩沖系統(tǒng)進行電泳。但是，TAE的缺點是緩沖容量小，除非有循環(huán)裝置使兩極的緩沖液得到交換，否則長時間電泳是不可選用的。

TBE緩沖液 丙烯酰胺實驗以及瓊脂糖凝膠電泳將調(diào)節(jié)pH值的酸溶液換成硼酸則獲得“TBE緩沖液"（Tris/Borate/EDTA）。TBE Buffer是分子實驗中常用的緩沖液，由Tris和硼酸、EDTA組成，所以簡稱為TBE buffer。該緩沖液常用于聚電泳實驗中。TBE Buffer為無色澄清液體，可在室溫中儲存，25℃時的pH值為8.2~8.4。在使用時要注意的是TBE Buffer中不能含有DNA水解酶和RNA水解酶的活性。

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