細(xì)胞鋪板不勻的解決方法有哪些？

細(xì)胞接種鋪板作為體外藥理實驗中最基本的技能，是實驗成敗的關(guān)鍵因素。鋪板不勻又是科研實驗中通往成功道路的一大障礙，細(xì)胞聚集導(dǎo)致的接觸抑制現(xiàn)象使實驗數(shù)據(jù)的可信度大打折扣。本片文章將會介紹細(xì)胞鋪板不勻的解決方法有哪些？一起來跟小編漲知識吧！

對于96孔板，每孔通常加入100μL細(xì)胞懸液。加樣方式為傾斜槍頭，從孔的左邊靠近底部緩慢加入（加樣過快同樣容易導(dǎo)致細(xì)胞聚集）。筆者建議，每加完半拉板子時，把細(xì)胞重新混勻，繼續(xù)加樣。加樣結(jié)束后，鏡下觀察如有局部不均勻現(xiàn)象，可以采取敲擊法，具體操作如下：將板子置于臺面上，左手持住板子的左邊，右手輕輕敲擊板子的右邊緣(5-8次)，力度太強或次數(shù)太多會反而更易導(dǎo)致細(xì)胞聚集。將板子順時針旋轉(zhuǎn)，依次敲擊剩余三個邊（據(jù)說逆時針效果不好），靜置約5-10分鐘后，放入37℃培養(yǎng)箱。

對于6孔板、12孔板或24孔板，為防止表面張力導(dǎo)致的中間液面太低細(xì)胞聚集的現(xiàn)象。通常每孔首先滴加少量培基，輕輕晃動浸潤整個孔底以保證板子的孔底都是濕潤的，這樣加液后細(xì)胞懸液會平鋪在整個孔底，可以避免加在中間位置和加在周邊晃勻后周邊細(xì)胞局部太多的現(xiàn)象，細(xì)胞分散會較均勻。注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺靜置一下（5-10分鐘）。鏡下觀察細(xì)胞均勻度，如不均勻可采用以下8字法、十字法及震蕩法等方法進(jìn)行細(xì)胞均勻度處理。具體操作如下：

方法一(8字法)：這種方法也是大家最常見的細(xì)胞搖勻方法。橫向8字搖勻法參考下圖，搖動次數(shù)根據(jù)鏡下觀察和個人力度具體分析（參考：保證液體不被晃動出去，8字晃動5次理論上就可以基本晃勻）。搖勻結(jié)束，切忌在鏡下移動觀察視野太久，以免伴隨著輕微的移動，細(xì)胞又往中間聚集。

方法二(十字法): 細(xì)胞鋪完板后，在水平方向上，上下左右四個方向進(jìn)行移動，呈十字形狀，重復(fù)5-6次。有些同學(xué)覺得十字法搖勻效果并不好，方法關(guān)鍵的是搖完后最好直接放入培養(yǎng)箱中，不要再做過多的移動（也有同學(xué)建議可以在培養(yǎng)箱中搖勻）。另外，同樣不建議放到鏡下長時間去觀察。

方法三(十字類似法)：細(xì)胞鋪完板后，放在水平板面上先上下移動，再左右移動，每個方向5-6次。其他具體操作同十字法。

方法四(震蕩法)：細(xì)胞懸液加完后，將細(xì)胞培養(yǎng)板抬高，對著燈光，從底部往上看，看細(xì)胞有沒有抱團(tuán)。然后從底部敲擊，使之分散。如果實驗室有平板振蕩器的話，我建議用這個儀器稍振蕩一下，效果不錯，就是振幅小，頻率高的那種。（個人不太推薦這種方法，板子接觸振蕩器后增加了染菌的風(fēng)險，而且轉(zhuǎn)速的調(diào)節(jié)和時間的掌握比較困難）。
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