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當前位置:首頁技術文章南京建成丙氨酸氨基轉移酶測試盒微板法(C009-2-1)現貨供應

南京建成丙氨酸氨基轉移酶測試盒微板法(C009-2-1)現貨供應

更新時間:2024-04-11點擊次數:1400

產品名稱:南京建成丙氨酸氨基轉移酶測試盒微板法(C009-2-1)現貨供應

產品貨號:C009-2-1

產品品牌:南京建成

產品規格:96T

操作過程:

1、樣本前處理:

①、血清(漿)及其它液體樣本待測:直接測定。

②、動物組織樣本:準確稱取組織重量,按重量(g):體積 (mL)=1:9 的比例,加入 9 倍體積的生理鹽水,冰水浴條件 下機械勻漿,2500 /分,離心 10 分鐘,取上清液待測。

③、培養細胞樣本前處理:將收集好的細胞用等滲緩沖液(推 薦 0.1mol/L pH77.4 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水)清洗 12 次;1000 /,離心 10 分鐘,棄上清,留細胞沉淀,加入勻 漿介質(推薦加入 0.1mol/L pH77.4 磷酸鹽緩沖液或生 理鹽水),冰水浴條件下超聲破碎或手動勻漿,制備好的 勻漿液不離心,待測。

2、操作表:


測定孔

對照孔

基質液(μL37℃已預溫

20

20

待測樣本(μL

5


37℃反應 30 分鐘

 (測定孔每吸取一個樣本,將吸嘴伸入孔板底部基質液中, 反復吸打混勻,但注意不要吸入氣泡)

2,4—*肼液(μL)

20

20

待測樣本(μL


5

37℃反應 20 分鐘

(對照孔每吸取一個樣本,將吸嘴伸入孔板底部液體中,反 復吸打混勻, 但注意不要吸入氣泡)

0.4mol/L 氫氧化鈉液(μL)

200

200

輕輕水平搖動 96 孔板混勻,室溫放置 15 分鐘,波長 510nm,酶標儀測定各孔 OD 值,以絕對 OD 值(測定孔 OD 值減去對照孔 OD 值),查標準曲線,求得相應的 ALT/GPT 活力單位。

注意事項:

1、比色法中常用的有賴氏(Reitman-Frankel)法及金氏(King)法。賴氏法標準曲線所定單位數,是用實驗方法和卡門氏分光 光度法(速率法)作對比測定求得的。以卡門氏單位報告結果,比較準確。 卡門氏單位定義:1mL 液體,反應液總容量3mL,波長340nm1cm 光徑,25℃1min 內所生成的丙酮酸,使NADH氧化成 NAD+而引起吸光度每下降0.001 為一個單位(1卡門氏單位=0.482 U/L25℃)。

2、一般血清標本內源性酮酸很少,血清對照孔吸光度值接近試劑空白孔(以雙蒸水代替血清,其他和對照孔同樣操作)。所以,成批標本測定時,一般不需要每一標本都作本身血清對照孔,以試劑空白孔代替即可,但對脂血、黃疸或溶血血清,每份標本應作對照孔。

3、酶活力超過 150 卡門氏單位時,用生理鹽水稀釋血清后重測。

4、應將一般血清的對照孔(或稱標本空白孔)的吸光度作為日常質控的指標之一;如相差大,可考慮α-酮戊二酸濃度、DNPH濃度及儀器等原因引起。

5、血清中 ALT 在室溫(25℃)可保存2 天,在04℃可保存一周,在-25℃可保存 1 個月。

歡迎訂購:

貨號

產品名稱

規格

C009-2-1

Alanine aminotransferase Assay Kit

96T

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