細胞實驗的常見問題

　　細胞培養(yǎng)是指從體內(nèi)組織取出細胞在體外模擬體內(nèi)環(huán)境下，使其生長繁殖，并維持其結(jié)構(gòu)和功能的一種培養(yǎng)技術(shù)。細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)物可以是單個細胞，也可以是細胞系。細胞復(fù)蘇是細胞培養(yǎng)的重要環(huán)節(jié)，下面讓我們一起來看看細胞實驗的常見問題都有哪些吧！
 

　　1.如何選用細胞系培養(yǎng)基？
 

　　優(yōu)先根據(jù)細胞來源公司提供的培養(yǎng)條件，其次參考ATCC推薦細胞對應(yīng)培養(yǎng)基。一般建議不要隨意更換培養(yǎng)基種類。細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)的細胞培養(yǎng)基，若驟然使用與原先提供的培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基，可能造成細胞形態(tài)發(fā)生變化或無法存活，以及細胞的表型功能丟失。
 

　　2.為何培養(yǎng)基用一段時間后，顏色偏紫？
 

　　培養(yǎng)基隨著多次開蓋會使培養(yǎng)液CO2 逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性從而變紫，尤其是剩余的培養(yǎng)基越少越容易變紫。可將培養(yǎng)瓶瓶蓋旋松放入二氧化碳培養(yǎng)箱校正溶液PH值，過一段時間就會變回正常。變紫的培養(yǎng)基是可以繼續(xù)使用的，培養(yǎng)細胞時在培養(yǎng)箱會自動恢復(fù)顏色。
 

　　3.細胞培養(yǎng)液變黃變渾，如何處理？
 

　　細胞培養(yǎng)液變黃多半是細胞密度過大，細胞增殖速度過快，產(chǎn)生大量酸性代謝廢物，導(dǎo)致細胞營養(yǎng)不足。而培養(yǎng)液變渾多半是發(fā)生了細菌污染。出現(xiàn)這種情況應(yīng)立即進行消化傳代處理。
 

　　4.血清中出現(xiàn)的沉淀是什么，有影響嗎？
 

　　①纖維蛋白，是經(jīng)常出現(xiàn)的較大沉淀物，可達到1-2mm，用肉眼可觀察到；
 

　　②膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)，是血清出現(xiàn)沉淀物的常見原因；
 

　　③磷酸鈣，也是一種常見沉淀物，通常會使血清出現(xiàn)渾濁，并且在37℃培養(yǎng)時會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點，這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動，因此經(jīng)常被誤認為是微生物污染。
 

　　5.細胞何時換液最佳？
 

　　①細胞消化傳代后，建議隔天或隔兩天換一次液；
 

　　②細胞傳代后，發(fā)現(xiàn)碎片多、死細胞多，在細胞形態(tài)已經(jīng)形成的前提下可第二天換液；
 

　　③對于生長速度較慢的細胞，可多放點培養(yǎng)基，減少換液次數(shù)，讓細胞靜養(yǎng)；
 

　　④細胞傳代后，細胞分布不均、細胞堆疊、細胞間隙大、局部密度大，這些情況下不用換液，可采取消化重鋪的方式。
 

　　7.細胞支原體污染如何處理？
 

　　支原體污染是比較難去除的，特別容易復(fù)發(fā)，一般建議直接更換新的細胞，如特別精貴或重要的細胞可嘗試使用四環(huán)素、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素(泰樂霉素)、喹諾酮類抗生素。
 

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