重組蛋白產(chǎn)品正確溶解步驟

一、重組蛋白

重組蛋白（recombinant protein）是指應(yīng)用重組 DNA 或重組 RNA 技術(shù)而獲得的蛋白質(zhì)。重組蛋白工程先應(yīng)用基因克隆或化學(xué)合成技術(shù)獲得目的基因（gene of interest，GOI），連接到適合的表達(dá)載體，導(dǎo)入到特定的宿主細(xì)胞，利用宿主細(xì)胞的遺傳系統(tǒng)，表達(dá)出有功能的蛋白質(zhì)分子。重組蛋白的正確溶解步驟包括離心、溶解和（可能的話）進(jìn)一步處理。

二、重組蛋白溶解步驟一

開蓋前離心試劑管。凍干粉在運(yùn)輸過程中可能會(huì)因顛簸而漂散并粘貼于管壁或管蓋上，所以在打開塑料瓶蓋前，需將凍干粉通過離心收集到管底，以便用很小體積的液體即可將凍干粉wan全溶解。一般需要3000-3500rpm離心5min，效果良好。如果沒有高速離心機(jī)，可以使用較低的轉(zhuǎn)速進(jìn)行較長時(shí)間的離心。

?三、重組蛋白溶解步驟二

用無菌水重懸至0.1-1.0 mg/ml，不可振蕩。這個(gè)步驟即為溶解步驟，非常重要。使用推薦的溶液將凍干粉重懸至適當(dāng)?shù)臐舛取?duì)于短期實(shí)驗(yàn)（<=7天），建議的濃度不低于100 μg/mL。對(duì)于長期實(shí)驗(yàn)（>=7天），需要使用含載體蛋白（如BSA、HSA、FBS或海藻糖）的溶液進(jìn)一步稀釋，然后分裝凍存于-20°C至-80°C。一定要用推薦的溶液重懸(或溶解)凍干粉。蛋白的溶解性與很多因素有關(guān)，其中比較重要的是pH值和離子強(qiáng)度。產(chǎn)品說明上所標(biāo)明的溶解液是能夠?qū)⒃摷?xì)胞因子或重組蛋白wan全溶解的液體。如果您所用的溶解液的pH值和離子強(qiáng)度與說明書中所標(biāo)明的不符，很多時(shí)候會(huì)造成細(xì)胞因子或重組蛋白不能wan全溶解或者根本無法溶解，這樣所配得的細(xì)胞因子或重組蛋白必然活性不夠或喪失。

四、重組蛋白溶解步驟三

該重懸液在2-8℃最長可保存1周。用說明書上推薦的溶液將細(xì)胞因子或重組蛋白重懸到推薦的濃度后，細(xì)胞因子或重組蛋白可放置在2-8℃，即冰箱的冷藏室。在這種條件下，細(xì)胞因子或重組蛋白的活性最長可保持1周。這對(duì)一個(gè)周期為5-7天的實(shí)驗(yàn)，如DC(樹突狀細(xì)胞)的誘導(dǎo)成熟是足夠的。在此期間，只要每次從冰箱里吸取一定量的細(xì)胞因子或重組蛋白溶液加入到培養(yǎng)體系內(nèi)即可。

其實(shí)，說明書上推薦的濃度對(duì)于一般的實(shí)驗(yàn)來講是比較高的。所以用戶通常會(huì)將該溶液進(jìn)一步稀釋后再放在4℃保存，待1周內(nèi)用完。如進(jìn)行稀釋，必須遵照下面第4步的方法，即需用含載體蛋白的溶液進(jìn)行稀釋，否則稀釋后的細(xì)胞因子或重組蛋白很容易會(huì)粘附在管壁或瓶壁上，使得溶液中的細(xì)胞因子或重組蛋白的濃度下降，細(xì)胞因子或重組蛋白的總活性則大為減弱。

五、RD重組Monkeypox蛋白產(chǎn)品推薦

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