細(xì)胞凋亡的檢測

　　一、光學(xué)顯微鏡觀察
 

　　凋亡細(xì)胞的主要特征為核染色質(zhì)致密深染，形成致密質(zhì)塊，有時可碎裂。
 

　　檢測方法：細(xì)胞涂片或組織石蠟切片作HE染色或Giemsa染色，在高倍物鏡下觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)改變，結(jié)合顯微測量工具可作凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)。
 

　　二、視頻時差顯微技術(shù)
 

　　細(xì)胞培養(yǎng)中常用，通過相差顯微鏡可動態(tài)觀察細(xì)胞凋亡的變化過程，尤其是觀察細(xì)胞表和外形的變化。
 

　　檢測方法：收集2×10^5細(xì)胞/ml培養(yǎng)的細(xì)胞，置于多孔培養(yǎng)板，加入凋亡誘導(dǎo)劑，在帶有自動攝像裝置的相差顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞的動態(tài)改變，每隔1分鐘作序列攝影，連續(xù)24小時。如同進(jìn)行熒光染色，可參熒光晃微鏡下觀察和攝影。
 

　　三、電子顯微鏡觀察
 

　　雖然光學(xué)顯微鏡下可以看見胞膜起泡現(xiàn)象和凋亡小體，但凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化大多發(fā)生在超微結(jié)構(gòu)，因此用光鏡觀察難以令人滿意，而透射電鏡可清楚地觀察到細(xì)胞結(jié)構(gòu)在凋亡不同時期的變化。電鏡形態(tài)學(xué)觀察是迄今為止判斷凋亡經(jīng)典、可靠的方法，被認(rèn)為是確定細(xì)胞凋亡的金標(biāo)準(zhǔn)。
 

　　檢測方法：透射電鏡標(biāo)本經(jīng)戊二醛和餓酸雙重固定，丙酮脫水，環(huán)氧樹脂包埋，超薄切片，醋酸枸椽酸電子又重染色，透射電鏡觀察。掃描電鏡標(biāo)本經(jīng)戊二醛和二酸雙重固定，乙醇逐級脫水，二氧化碳臨界點(diǎn)干燥，真空噴金，掃描電鏡觀察。
 

　　四、流式檢測
 

　　流式細(xì)胞儀檢測凋亡細(xì)胞是通過檢查其光射特征及熒光參數(shù)時行的。細(xì)胞穿過流式細(xì)胞儀的激光束集點(diǎn)時使激光發(fā)生散射，分析散射光可以提供細(xì)胞大小及結(jié)構(gòu)的信息。散射光包括前向散射光和左向角散射光兩種，前向散射光的強(qiáng)度與細(xì)胞大小、體積相產(chǎn)，側(cè)向散射光的強(qiáng)度與細(xì)胞結(jié)構(gòu)的析射性、顆粒性(granu-larity)有關(guān)。
 

　　檢測方法：獲取密度1×10^6細(xì)胞/ml左右的細(xì)胞懸液，精洗，固定，熒光染料染色，上流式細(xì)胞儀分析。
 

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