分析型流式細胞儀檢測原理

將待測樣品制成單細胞懸液，在鞘液的包裹下進入流式細胞儀內(nèi)的檢測區(qū)域，細胞在激光的照射下會發(fā)生散射和折射，產(chǎn)生的散射光信號和熒光信號由不同的通道接收。其中前向角散射光（FSC）的強度與細胞直徑成正相關，可以理解為細胞直徑越大，F(xiàn)SC越強，細胞直徑越小，F(xiàn)SC越弱。所以可以利用細胞的FSC值初步比較細胞的大小，利用FSC值對細胞進行分群和分類。  

側向角散射光（SSC）的強度與細胞內(nèi)顆粒結構復雜程度成正相關（與細胞中所含的細胞器、細胞核等的數(shù)量成正比），可以理解為細胞內(nèi)顆粒結構越復雜，SSC越強；細胞內(nèi)顆粒結構越簡單，SSC越弱。所以可以利用細胞的SSC值初步比較細胞的顆粒度，利用SSC值對細胞進行分群和分類。

當細胞通過激光束時，檢測器會檢測到細胞或顆粒的散射光，放置在前面的檢測器檢測FSC值，而放置在側面的多個檢測器檢測SSC值。通過綜合分析前向散射FSC和側向散射SSC的數(shù)據(jù)，便能根據(jù)細胞大小、形狀和復雜度將其進行分群分類。由于樣品細胞不需要標記任何熒光化合物偶聯(lián)抗體，直接上樣分析得到FSC值和SSC值，其值代表細胞的大小和顆粒度兩個物理特征，所以FSC-SSC散點圖又稱為 “物理圖"。

分選型流式細胞儀檢測原理

當細胞懸液放入樣品管中，被高壓壓入流動室內(nèi)。流動室內(nèi)充滿鞘液，在鞘液的包裹和推動下，細胞被排成單列，以一定速度從流動室噴口噴出。在流動室的噴口上配有一個超高頻的壓電晶體，充電后振動，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正、負不同的電荷，當液滴流經(jīng)過帶有幾千伏的偏轉板時，在高壓電場的作用下偏轉落入各自的收集容器中，沒有充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實現(xiàn)細胞的分離。流式細胞儀除了根據(jù)FSC和SCC散射度或熒光(如DNA、RNA或蛋白含量，酶活性，特異抗原) 散射度差異來分離細胞外，更多的采用細胞表面抗原標記的熒光強度差異來分離細胞。每種細胞表面具有du te的抗原，當形態(tài)學檢測難以區(qū)別時，免疫表型參數(shù)對細胞分選有決定性作用。

流式細胞術結果

熒光信號和散射光信號通過波長選擇的濾光片，由相應的光電管和電子檢測器接收并轉換成電信號，經(jīng)放大器放大后送入計算機并進行分析顯示和結果輸出，測定的結果常用流式直方圖、流式散點圖、流式密度圖和流式等高線圖來表示。

流式細胞術樣本類型

流式細胞儀可檢測多種樣本：外周血、骨髓、細胞穿刺液、洗脫液、實體組織、培養(yǎng)細胞、微生物。

流式細胞術應用

1.流式細胞術可以用來檢測細胞表面以及胞內(nèi)的各種標志，對細胞進行分群鑒定以及各種蛋白表達量高低的比較。

2.通過標記Ki67、BCL-2、caspases等增殖及凋亡相關基因，流式細胞術可用來檢測細胞的增殖以及凋亡。

3.流式細胞術可用來分析細胞周期。細胞核DNA含量隨著細胞增殖周期時相的不同而發(fā)生變化，用DNA染料進行染色，DNA含量多，熒光信號強，DNA含量少，熒光強度低。

4.在腫瘤學研究中尤其常用，流式細胞術可以用于判斷藥物對腫瘤細胞影響、腫瘤的生長速度等。