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        百奧益康人腦組織通用解離試劑盒使用指南

         更新時間:2025-03-04    點擊量:377

        百奧益康人腦組織通用解離試劑盒該怎么使用呢?快來收看本期內容。

        一、人腦組織通用解離試劑盒簡介

        本產品適用于人腦組織的細胞懸液的分離制備,本產品利用酶溫和、快速有效地破壞細胞外基質,釋放細胞,從而生成單細胞懸浮液。制備的單細胞懸液可用于單細胞測序、細胞培養或其他細胞相關檢測。

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        二、人腦組織通用解離試劑盒使用說明

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        【使用方法】

        準備工作:水浴鍋或雜交爐設置到37℃、配制含5%FBSPBS新鮮組織約200mg(黃豆粒大小),如圖1.

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        1.取一個5mL離心管,加入 2160μLBuferA,放入用 PBS 清洗干凈的組織樣本,并剪碎。

        2.添加800μLEnzymeB10μEnzyme C,顛倒混勻。

        3.放在 37℃水浴鍋或雜交爐中 20~30min。消化過程中,使用水浴鍋每隔3~5min 手動搖晃混勻,使用雜交爐轉速20~30/分鐘左右。

        4.每隔3~5min質檢一次細胞懸液,根據細胞總量及活性等確定消化停止時間5.消化完成后,用 70 μm 細胞篩進行過濾,收集濾液于新的15 mL離心管中。6.3mLRPMI1640培養基或5%FBSPBS 于消化的離心管中,上下顛倒涮洗管壁涮洗液同樣經過同一個 70μm 細胞篩進行過濾,收集濾液于第5步的15 mL 離心管中7.將收集液于4℃300xg離心5min,棄上清

        8.5mL5%FBSPBS重懸沉淀,吹打混勻.

        9.放入水平離心機,4℃300xg離心5min,棄上清

        10.用含5%FBSPBS 重懸沉淀至 2mL.

        11.加入1mLDRS(細胞碎片去除緩沖液),用5mL移液器緩慢吹打混勻10次。不要渦旋振蕩。

        12.緩慢加入3mLPBS,輕輕覆蓋在最上層,千萬不要混勻,如圖2.

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        13.務必使用水平離心機,并設置為居中的加速度和減速度,4°℃3000xg,離心 20 min

        14.離心后,緩慢取出離心管。溶液分成3層。緩慢吸出全部上清液(優先吸出碎片層)保留細胞沉淀(上清盡量去除干凈),如圖3和圖4.:離心管要輕拿輕放,確保分層明顯,不同層的溶液間不互相混合

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        15.向沉淀中加人適當體積的含5%FBSPBS,加人三倍體積的紅細胞裂解液(BA3311).

        冰上裂紅5min。具體可以參考BA3311紅細胞裂解液說明書。

        16.加入等體積的 PBS混勻,終止裂紅,4℃450xg,離心5min,棄上清

        17.10mL5%FBSPBS重懸沉淀,吹打混勻.

        18.4℃300xg離心5min,棄上清.

        19.50μL~2mL 5%FBSPBS 重懸沉淀,根據所需的細胞濃度調整重懸液的體積。20.若有明顯細胞結團,則使用 20μm細胞篩進行過濾,收集濾液于新的離心管中。若無明顯細胞結團,則可跳過此步驟.

        21.用細胞計數儀對細胞懸液進行質控并記錄,質控結束后請立即進行后續實驗。

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