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        Lipo 2000轉(zhuǎn)染步驟(24孔板)

         更新時間:2025-04-02    點擊量:488

        一、Lipo 2000介紹

        賽默飛Lipo2000轉(zhuǎn)染試劑是一種多功能轉(zhuǎn)染試劑,經(jīng)證明可以將各種有效載荷有效地轉(zhuǎn)染到各種貼壁和懸浮細胞系中。

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        二、Lipo 2000轉(zhuǎn)染步驟

        1.轉(zhuǎn)染前一天,胰酶消化細胞并計數(shù)(0.5-2x105)細胞鋪板,使其在轉(zhuǎn)染日密度為90-95%。細胞鋪板在0.5 ml含血清,不含抗生素的正常生長的培養(yǎng)基中。2.對于每孔細胞,使用50 ul無血清培養(yǎng)基(OPTI-MEM I培養(yǎng)基)稀釋0.8-1.0ugDNA,輕輕混勻。

        3.使用前將Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑輕輕混勻,用50ul無血清培養(yǎng)基(OPTIMEM I培養(yǎng)基)稀釋1-3 ul Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑,輕輕混勻。Lipofectamine2000稀釋后,在5分鐘內(nèi)同稀釋的DNA混合(<30分鐘)NOTE:若使用DMEM培養(yǎng)基,則需在5分鐘內(nèi)同稀釋的DNA混合。4.混合稀釋的DNA(第二步)和稀釋的Lipofectamine 2000(第三步)。室溫放置20分鐘。

        5.(optional)24孔板中的舊營養(yǎng)液吸出,用無血清培養(yǎng)基清洗兩次。加入0.5ml無血清配養(yǎng)基。

        6.直接將復(fù)合物加入到每孔中,搖動培養(yǎng)板,輕輕混勻。

        7.37℃,5%CO2中保溫24-48小時。無需去掉復(fù)合物或更換培養(yǎng)基。或者在4-5小時后更換培養(yǎng)生長基也不會降低轉(zhuǎn)染活性。

        8.在細胞中加入復(fù)合物24-72小時后,分析細胞抽提物或進行原位細胞染色,檢測報告基因活性。這依賴于細胞類型和啟動子活性。對穩(wěn)定表達,在開始轉(zhuǎn)染一天后將細胞傳代至新鮮培養(yǎng)基中,兩天后加入篩選抗生素。進行穩(wěn)定表達需要數(shù)天或數(shù)周。貼壁細胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染:

        轉(zhuǎn)染后24小時,將細胞以>1:10的比例傳代至新鮮培養(yǎng)基中,次日加入選擇性培養(yǎng)基。

        三、Lipo2000購買渠道

        賽默飛代理——天津益元利康生物科技有限公司公司產(chǎn)品線涉及細胞與基因治療、免疫學(xué)、分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)等多個方向,專注于生命科學(xué)試劑、耗材、細胞、儀器等產(chǎn)品銷售

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