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022-66387942引言
CD8 T細胞在免疫應答中扮演核心角色,其分離純度直接影響下游實驗的可靠性。然而,傳統分離方法常面臨操作復雜、細胞活性受損等問題。英諾思推出的EasyIso™ 人類CD8 T細胞分離試劑盒(貨號SN3103),通過創新的無柱磁極分離技術,實現高純度、快速且溫和的CD8 T細胞分選,為科研與臨床研究提供高效工具。上期介紹了原理《英諾思EasyIso™ 人類CD8 T細胞分離試劑盒(SN3103)實驗原理》,這期介紹一下操作步驟。
一、操作步驟:快速四步法
1. 樣本制備:將PBMC單細胞懸液濃度調整至1×10? cells/mL;
2. 抗體孵育:按100 μL/mL加入EasyIso™ Human CD8 T Cell Isolation Cocktail,常溫孵育10分鐘
3. 磁珠結合:加入鏈霉親和素納米磁珠(100 μL/mL),輕柔混勻后孵育5分鐘;
4. 磁極分離:
使用磁力架吸附3-5分鐘(單孔/聯排架);
傾斜磁力架,將富含CD8 T細胞的上清轉移至新管中,即可獲得高純度細胞。
全程僅需20分鐘,顯著提升實驗效率。
二、關鍵試劑與設備要求
緩沖液:推薦使用FACS Buffer(1×PBS + 0.02% EDTA + 2% FBS),提高細胞得率;
耗材:70 μm無菌濾網、無菌離心管;
儀器:離心機、磁力架(兼容單孔或聯排管)。
三、使用建議與注意事項
PBMC制備:推薦采用淋巴細胞分離液進行密度梯度離心,避免紅細胞裂解法;
無菌操作:全程需在超凈臺中進行,防止污染;
滲透壓穩定:確保FACS Buffer配制準確,保護敏感免疫細胞;
磁珠處理:使用前充分震蕩混勻磁珠30秒,確保結合效率。
四、數據驗證:純度高達91.2%
實驗數據顯示,使用SN3103試劑盒分選后:
分選前:PBMC中CD8+ T細胞占比14.3%;
分選后:CD3+CD8+ T細胞純度提升至91.2%(圖B),滿足高標準實驗需求。
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