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更新時(shí)間：2025-07-01
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以下是 Polyplus jetPRIME® 轉(zhuǎn)染試劑 的標(biāo)準(zhǔn)操作步驟（適用于貼壁細(xì)胞），操作前請(qǐng)確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)、核酸純度及實(shí)驗(yàn)條件適配性。
一、試劑準(zhǔn)備
試劑名稱 | 要求 |
jetPRIME® | 使用前平衡至室溫，輕渦旋混勻（勿劇烈震蕩） |
核酸（DNA/siRNA） | 高純度（OD<sub>260/280</sub>≈1.8-2.0），無菌無內(nèi)毒素，溶于無菌水或TE緩沖液 |
jetPRIME® Buffer | 提供無菌緩沖液（若試劑盒內(nèi)含） |
細(xì)胞培養(yǎng)基 | 含血清 & 抗生素（轉(zhuǎn)染全程無需更換無血清培養(yǎng)基） |
二、 Polyplus jetPRIME® 轉(zhuǎn)染試劑操作流程（24孔板為例）
Day 0: 細(xì)胞鋪板
1. 細(xì)胞計(jì)數(shù)：消化對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，調(diào)整密度。
2. 鋪板：
- 每孔加入 0.5~1×10? cells（貼壁細(xì)胞）
- 用 500μL wan-quan培養(yǎng)基（含10%血清+抗生素）培養(yǎng)。
- 關(guān)鍵：轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度需達(dá) 70~90% 匯合度（過度生長(zhǎng)降低效率）。
Day 1: 轉(zhuǎn)染（耗時(shí)<15分鐘）
> ?? 所有步驟在無菌環(huán)境（超凈臺(tái)）操作，試劑室溫平衡。
步驟 | 操作 |
1. 稀釋核酸 | 取 1μg DNA（或 1.5~5nM siRNA）加入 200μL jetPRIME Buffer 中，輕混勻（如無Buffer可用無菌Opti-MEM替代）。 |
2. 加轉(zhuǎn)染試劑 | 向稀釋核酸中加入 2μL jetPRIME®（DNA:jetPRIME = 1μg:2μL）。 |
3. 混合孵育 | 立即渦旋10秒 → 室溫靜置10分鐘（溶液變渾濁屬正常現(xiàn)象）。 |
4. 加入細(xì)胞 | 將混合液 逐滴加入細(xì)胞孔，輕搖培養(yǎng)板混勻。 |
5. 繼續(xù)培養(yǎng) | 放回37℃ CO<sub>2</sub>培養(yǎng)箱，無需更換培養(yǎng)基。 |
三、關(guān)鍵優(yōu)化參數(shù)
變量 | 推薦條件 | 調(diào)整建議 |
細(xì)胞密度 | 70~90% 匯合度 | 過密→降低效率；過低→細(xì)胞毒性↑ |
DNA:jetPRIME比例 | 1μg DNA : 2μL 試劑（24孔板標(biāo)準(zhǔn)） | 按比例放大/縮小（如6孔板用4μg DNA+8μL試劑） |
siRNA用量 | 終濃度 10~50nM（參考細(xì)胞類型） | 敏感細(xì)胞從低濃度（10nM）起始測(cè)試 |
孵育時(shí)間 | 轉(zhuǎn)染后 24~72小時(shí) 檢測(cè)表達(dá)（峰值通常48h） | 熒光蛋白觀察24h，功能實(shí)驗(yàn)需48~72h |
四、懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染步驟
若轉(zhuǎn)染懸浮細(xì)胞（如Jurkat、THP-1）：
1. 離心收集細(xì)胞 → 重懸于 新鮮培養(yǎng)基（密度 0.5~1×10? cells/mL）。
2. 按 1mL細(xì)胞懸液 + 混合液（1μg DNA + 2μL jetPRIME） 加入EP管。
3. 輕柔混勻 → 37℃靜置 15~30分鐘 → 轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)板繼續(xù)培養(yǎng)。
五、 Polyplus jetPRIME® 轉(zhuǎn)染試劑使用注意事項(xiàng)
1. 細(xì)胞狀態(tài)：僅用健康、低傳代細(xì)胞（傳代<30）。
2. 試劑保存：jetPRIME® 4℃避光保存（非-20℃），保質(zhì)期內(nèi)穩(wěn)定。
3. 避免污染：核酸和Buffer嚴(yán)格無菌操作。
4. 毒性處理：若細(xì)胞死亡率高：
- ↓ 降低jetPRIME用量（如1μg DNA用1.5μL試劑）
- ↓ 縮短轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)時(shí)間（24h后換液）。
5. 對(duì)照設(shè)置：必設(shè) 空載體對(duì)照組 + 未轉(zhuǎn)染組。
六、Polyplus jetPRIME® 轉(zhuǎn)染試劑替代方案（特殊情況）
場(chǎng)景 | 替代方案 |
高難度細(xì)胞（原代、神經(jīng)元） | 改用 jetOPTIMUS® |
體內(nèi)轉(zhuǎn)染 | 搭配 in vivo-jetPEI® |
大片段DNA（>15kb） | 測(cè)試 jetPEI® |
問題排查：若效率低 → 檢查核酸純度、細(xì)胞密度、試劑比例；或聯(lián)系 polyplus代理——天津益元利康生物科技有限公司獲取技術(shù)支持。
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