一、一抗4℃孵育安全孵育窗口：4-24小時(shí)

*數(shù)據(jù)來源：Nature Methods (2021) 對(duì)比實(shí)驗(yàn)，樣本為Hela細(xì)胞裂解液

二、一抗4℃孵育超時(shí)風(fēng)險(xiǎn)紅線（＞24小時(shí)）

?? 72小時(shí)極限測(cè)試結(jié)果

注： 含0.02%疊氮鈉時(shí)失活率降至18%

三、一抗4℃孵育科學(xué)優(yōu)化方案

1. 低豐度蛋白解決方案

增強(qiáng)劑聯(lián)用：

添加 0.5% Casein → 信號(hào)提升2.1倍（縮短至12小時(shí)）

使用 Realtime HRP底物 → 檢測(cè)限降低至0.1pg（避免過夜）

2. 超長(zhǎng)孵育必做防護(hù)

1. 密封防干：膜置于密封袋+滴加緩沖液覆蓋

邊緣用玻棒壓合（參考Bio-Rad密封法）

2. 抑菌處理： 含0.02%疊氮鈉（注意：HRP酶系統(tǒng)禁用！）

3. 低溫恒定： 冷房（4℃）優(yōu)于冰箱 → 避免溫度波動(dòng)

四、一抗4℃孵育替代方案推薦

操作口訣

“ 4度過夜最穩(wěn)妥，24小時(shí)是紅線；
低豐蛋白加Casein，超長(zhǎng)孵育要密封！ "

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