超濾離心管操作步驟一:準備工作
從4°C冰箱中取出超濾管,使其恢復至室溫(約15-30分鐘),以防止冷膜在離心過程中破裂。
準備樣品:確保樣品已充分混勻,無大的不溶性顆粒物,以免堵塞膜孔。如有必要,可先進行離心或過濾預處理。
預冷離心機:將離心機預冷至4°C(除非您的樣品有特殊要求),以減少蛋白質變性和降解。
佩戴手套:操作全程佩戴手套,防止皮膚油脂污染膜或樣品。
超濾離心管操作步驟二:預處理/潤洗膜 (重要步驟!)
向樣品室中加入適量預冷的超純水或目的緩沖液(通常加至最大容量的一半以上)。
蓋上蓋子,在指定離心力下離心1-2分鐘。
棄去濾出液。此步驟可以去除膜孔中的保護劑(如甘油),并激活膜孔,提高回收率和流速。
超濾離心管操作步驟三:加入樣品
將預處理的超濾管放入一個新的收集管中。
用移液器將樣品加入樣品室中。注意:不要超過最大標定體積,以免樣品溢出污染濾膜外側。
平衡:如果同時處理多個樣品,務必在天平上用水配平至重量一致,以確保離心機平穩運行。
超濾離心管操作步驟四:離心濃縮
蓋上蓋子(如果蓋子有功能孔,確保其暢通)。
根據說明書推薦的離心力(× g)和時間進行離心。切勿使用制動(brake)功能,以免產生的負壓破壞膜結構。
起始離心條件參考:通常為2000-4000 × g,離心10-30分鐘。具體條件需根據樣品粘度、濃度和目標濃縮倍數進行調整。
離心后,檢查濾出液的體積。如需進一步濃縮,可棄去濾出液,將樣品室放回收集管中繼續離心。
超濾離心管操作步驟五:樣品回收
方法一(常規回收):離心完成后,小心地將超濾管倒扣在一個新的收集管上。以1000 × g 離心 1-2 分鐘,即可將濃縮的樣品回收至收集管中。
方法二(移液器回收):對于小體積樣品,可用移液器小心地吹打膜表面多次,將粘附的濃縮樣品吸下收集。注意:切勿用移液器jianduan觸碰或刺破超濾膜!
超濾離心管操作步驟六:清洗與保存
立即用大量超純水沖洗樣品室和膜,防止樣品殘留干涸堵塞膜孔。
短期保存:可浸泡在超純水或20%乙醇中,于4°C存放。
長期保存:清洗后,干燥,室溫避光保存。
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