一、RNA效率低的原因:
1)樣品裂解或勻漿處理不干凈;
2)最后得到地RNA沉淀未溶解;
3)樣品勻漿時加的TRIzol過少;
4)勻漿樣品后未在室溫下放至5分鐘;
5)吸取水相時混有有機相;
6)RNA沉淀未溶解等。
二、A260/A280<1.65的原因:
1)檢測吸光度時,RNA樣品不是溶于TE,而是溶于水。低離子濃度和低PH條件下,A280值會較高;
2)樣品勻漿時加地試劑量太少;
3)勻漿后樣品未在室溫放置2分鐘;
4)水相中混有有機相;
5)最后得到地RNA沉淀未溶解;
三、RNA降解原因:
1)組織取出后沒有馬上處理或冷凍;
2)樣品或提取地RNA沉淀保存于-5℃-20℃,未在-60℃-70℃保存;
3)細胞在胰酶處理時被破壞;
4)溶液或離心管未經RBase去處理;
四、Ezb DNA/RNA/組織提取試劑盒的使用注意事項:
1)在進行RNA提取實驗時,使用獨立的RNA提取專用試驗臺;
2)實驗過程中穿好實驗服,佩戴一次性滅菌手套,佩戴口罩,避免講話交流等,防止您的唾液和汗液中的RNaes酶污染實驗;
3)實驗過程中盡量使用一次性滅菌滅酶的塑料器皿,若不得不使用玻璃器皿,可以選擇使用0.1%的DEPC水浸泡處理24 h后再高壓滅菌去除DEPC,也可以使用干熱滅菌法進行滅菌;
4)RNA提取實驗中使用的所有器具及耗材都建議專門使用,并建議耗材設立一個獨立的區域存放,不與其他實驗混用;
5)RNA提取實驗中所用的試劑也應專用,不與其他實驗混用,所用的無菌水需要使用0.1%的DEPC處理后進行高壓滅菌。
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