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肝癌3D類器官培養基產品說明：肝癌類器官培養基（Hepatocarcinoma Organoid Medium）是一種為促進肝癌類器官體外形成和擴增而設計的培養基。它是一種無菌的液體混合系統，含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質等。該培養基的*配方可以提供一個較適合的細胞所需營養環境，選擇性地促進體外人肝癌類器官的生長。
肝癌3D類器官培養基產品優勢：
(1) 培養成功率高
(2) 體外持續擴增
(3) 保持腫瘤特征
(4) 藥敏結果與臨床數據接近
使用說明：
? 實驗前準備
（1）消化好的肝癌原代細胞懸液15mL無菌離心管、1.5mL離心管、24孔細胞培養板、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30 min。
（2）提前30min從4℃冰箱取出肝癌類器官培養基平衡至室溫，提前從-20℃冰箱取出所需體積的基質膠冰上融化。
? 肝癌類器官培養
（1）將消化好的肝癌細胞懸液計數，按照1-2萬細胞每孔計算所需的細胞數，根據計算好的體積吸取細胞懸液加入預冷的1.5mL離心管中。
（2）補齊預冷的DMEM/F12至所需體積，將預冷后的細胞懸液加入等體積的基質膠中輕輕混勻（全程冰上操作），然后將細胞與基質膠的混合液按照40μL/孔接種于24孔板。
（3）將接種好的培養板放入培養箱至少30min，待基質膠*凝固，然后沿24孔壁每孔緩慢加入500μL預先恢復至室溫的類器官培養基，3天后鏡下觀察類器官形成情況，粒徑大于50μm即認為類器官已經形成，每5天更換一次培養基進行培養，持續觀察類器官大小，鏡下觀察大部分類器官大小均大于50μm且大小不再增大即可收集類器官進行后續實驗。
? 肝癌類器官收集
（1）吸去培養基，每孔加入200μL基質膠解離試劑。
（2）輕輕吹打混勻，收集至15mL離心管中，37℃解離30min（具體解離時間根據實際情況決定，以無明顯大塊膠狀物為準），解離之后1500rpm離心3min，輕輕吸去上清，待用。
? 肝癌類器官傳代
（1）解離之后的細胞加入適量的消化酶，37℃，200rpm消化（具體時間根據類器官大小和數量決定，以無肉眼可見顆粒為準）。
（2）消化*后1500rpm離心3min，輕輕吸去上清，使用終止培養基重懸后1500rpm離心3min，加入預冷的DMEM/F12培養基進行重懸，計數，按照培養步驟操作繼續培養。
注意事項：
1.本產品在使用前需平衡至室溫。
2.使用產品時應注意無菌操作，避免污染。
3.為保持本產品的最佳使用效果，不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環境中。4.請于保質期內使用本產品，超出保質期，必須放棄使用。
5.樣本需為腫瘤術中樣本，且腫瘤細胞比例越高（至少>50%），培養成功率越高，不推薦用于少量樣本（如穿刺或者循環腫瘤細胞）的培養。
6.本產品僅用于科研用途，不能用于體外診斷。
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孫經理
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