什么是液體培養(yǎng)基？它的組分有哪些？

細(xì)胞培養(yǎng)，是人工創(chuàng)造與體內(nèi)生長(zhǎng)相似的環(huán)境，使細(xì)胞生長(zhǎng)、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)。培養(yǎng)基是一切體外培養(yǎng)的基礎(chǔ)，為細(xì)胞的生長(zhǎng)和代謝活動(dòng)提供了各種必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。根據(jù)培養(yǎng)基的來(lái)源和組成成分，它的發(fā)展經(jīng)歷了三個(gè)階段，分別是天然培養(yǎng)基階段、合成培養(yǎng)基階段以及無(wú)血清培養(yǎng)基階段。那么你知道什么是液體培養(yǎng)基嗎？它的組分是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

在20世紀(jì)50年代，當(dāng)時(shí)體外培養(yǎng)普遍直接采用組織凝塊、生物性液體和組織提取液，如血漿凝塊、血清、淋巴液、胚胎浸液等，這就是天然培養(yǎng)基階段。由于天然培養(yǎng)基的使用會(huì)帶來(lái)不可避免的病毒污染、批次間差異大等問(wèn)題，于是就有了合成培養(yǎng)基，其主要成分包括生長(zhǎng)因子、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、緩沖劑、抗生素等。合成培養(yǎng)基最初的配方是MEM，由Eagle在1959年shou次提出，之后經(jīng)過(guò)不斷發(fā)展涌出了各種不同配方的優(yōu)質(zhì)合成培養(yǎng)基，包括M199、DMEM、IMDM、PRMI1640等，這些經(jīng)典培養(yǎng)基到現(xiàn)在依舊是實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)用zui廣泛的。

按照物理性質(zhì)可將其分為：液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、脫水培養(yǎng)基。其中，液體培養(yǎng)基最為常見(jiàn)，它具有可進(jìn)行通氣培養(yǎng)或振蕩培養(yǎng)的優(yōu)勢(shì)，因?yàn)樗牧鲃?dòng)性便于精確控制培養(yǎng)基的溶液溫度、營(yíng)養(yǎng)濃度和氣體含量等；它對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)的附著能力要求小，細(xì)胞可快速擴(kuò)增；當(dāng)需要大量細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)也更經(jīng)濟(jì)高效。作為大家使用最為頻繁的細(xì)胞培養(yǎng)試劑，基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基在細(xì)胞培養(yǎng)中起到關(guān)鍵作用。

基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基的組分

為了滿足細(xì)胞的生長(zhǎng)需要，液體培養(yǎng)基一般都會(huì)含有水、能源物質(zhì)、氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)鹽和pH指示劑等。此外，還可能含有血清或血清替代成分。

（1）水

液體細(xì)胞培養(yǎng)基中90 %以上的成份是水。細(xì)胞對(duì)水的品質(zhì)非常敏感，水的品質(zhì)將直接影響細(xì)胞培養(yǎng)的效果。因此，細(xì)胞培養(yǎng)用水須經(jīng)過(guò)純化，品質(zhì)應(yīng)符合中國(guó)藥典注射用水標(biāo)準(zhǔn)或者超純水的標(biāo)準(zhǔn)。

（2）能源物質(zhì)

液體培養(yǎng)基的能源物質(zhì)以葡萄糖為主，少數(shù)含有半乳糖、果糖、甘露糖等。根據(jù)葡萄糖含量不同區(qū)分，代謝消耗較快的病理狀態(tài)細(xì)胞多選用高糖（4.5 g/L）培養(yǎng)基，單抗細(xì)胞融合時(shí)使用低糖（1.0 g/L）培養(yǎng)基。當(dāng)葡萄糖不足時(shí)，可以使用丙酮酸鈉為細(xì)胞提供碳源，并且部分細(xì)胞系對(duì)丙酮酸鈉具有依賴性。

（3）氨基酸

氨基酸是蛋白質(zhì)合成的基礎(chǔ)，不同細(xì)胞需要的氨基酸類型具有差異性。谷氨酰胺是一種氨基酸，也是一種重要能源物質(zhì)，但要注意它在溶液中不穩(wěn)定，代謝產(chǎn)物會(huì)損傷敏感細(xì)胞系。

（4）維生素

維生素參與酶構(gòu)成，是維持細(xì)胞生長(zhǎng)的生物活性物質(zhì)，在細(xì)胞代謝中起調(diào)節(jié)及控制作用。

（5）無(wú)機(jī)鹽

無(wú)機(jī)鹽的主要作用就是維持滲透壓平衡，調(diào)節(jié)pH。

（6）緩沖體系

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中造成培養(yǎng)基 pH 波動(dòng)的主要物質(zhì)是細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2，液體培養(yǎng)基通常采用NaHCO3或HEPES緩沖體系來(lái)為細(xì)胞生長(zhǎng)提供穩(wěn)定的pH環(huán)境。

（7）酚紅：酸堿指示劑。

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