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        超濾離心管使用方法

        更新時間:2025-08-12點擊次數:230

        超濾離心管操作指南:3大誤區毀樣本|附分子截留/離心參數對照表

        超濾回收率<50%?本文詳解Millipore/Amicon超濾管選型技巧、離心程序、防堵膜策略,提供蛋白濃縮/緩沖液置換/脫鹽全方案!附轉速-分子量計算公式+堵膜急救方案。

        一、超濾管選型黃金法則(立即避坑)

        需求

        膜材質

        截留分子量

        代表產品

        蛋白濃縮

        再生纖維素

        10kDa

        Amicon® Ultra-4

        病毒純化

        PES

        100kDa

        Millipore UFC9100

        核酸回收

        低吸附PVDF

        30kDa

        Vivaspin® 20

        內毒素去除

        超低吸附

        3kDa

        Amicon® Ultra-15

        >??選錯致命傷:截留分子量>目標物樣本穿透丟失!

        二、操作流程(4步提升回收率至>90%

        Step1預處理(防膜失效關鍵!)

        1.離心管冰上預冷

        2.注入1ml預冷PBS

        3.1500g×5min(活化膜孔,去除甘油/乙醇)

        Step2樣本加載

        參數

        標準值

        避坑要點

        最大裝載量

        80%管容積

        防溢出污染

        樣本粘度

        50cP(過高需稀釋)

        粘度檢測方法:移液器吸打阻力

        保留液體積

        ≥50μl(防干膜)

        定時觀察液面

        Step3離心程序(轉速/時間公式)

        ?離心力計算公式:

        RCF(g)=0.00001118×r×(RPM)2

        r=離心半徑cm

        分子量-離心參數表:

        截留分子量

        推薦離心力

        時長

        3kDa

        4000g

        20-30min

        10kDa

        3500g

        15-25min

        50kDa

        3000g

        10-15min

        >??防過熱技巧:4℃離心+10min暫停降溫

        Step4樣本回收

        -正置法:直接吸取濃縮液(回收率80-90%

        -倒置法(高價值樣本):

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        三、3大高頻問題急救方案

        問題1:膜堵塞(流速驟降)

        -處理步驟:

        1.0.1MNaOH反向沖洗10min

        2.超純水沖洗3

        3.500g×5min低速離心疏通

         問題2:回收率低

        -根因排查:

        現象

        原因

        對策

        濾液渾濁

        膜破裂

        更換新管(勿超速)

        管壁掛液明顯

        疏水吸附

        預處理加 0.01% Tween-20

         

        問題3:濃縮倍數不足

        -科學濃縮比計算:

        ```

        濃縮倍數=初始體積/終體積

        (推薦≤10倍,防蛋白沉淀)

        ```

        -高倍濃縮技巧:分次添加樣本(維持液面高度)

        四、不同應用場景參數優化


        實驗目標

        關鍵參數調整

        回收率

        蛋白濃縮

        4℃ + 3500g × 15min

        92%

        緩沖液置換

        預裝新緩沖液 ×3

        99%

        脫鹽

        超純水稀釋 ×5

        98%

        外泌體純化

        100kDa + 3000g ×30min

        80%




        五、產品推薦

        密理博millipore超濾離心管——天津益元利康生物科技有限公司,歡迎咨詢。

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