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Abcam細(xì)胞培養(yǎng)制備
2024-11-27
一、制備細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基所使用的培養(yǎng)基將取決于所使用的細(xì)胞類(lèi)型。例如:使用無(wú)菌技術(shù)在II級(jí)安全帽下工作。二、在顯微鏡下檢查細(xì)胞在生長(zhǎng)過(guò)程中，應(yīng)該每天檢查細(xì)胞，以確保它們健康并按預(yù)期生長(zhǎng)。它們應(yīng)該主要附著在燒瓶的底部，形狀圓而豐滿或細(xì)長(zhǎng)，并在其膜周?chē)凵涔饩€。這表明他們是健康的。介質(zhì)應(yīng)該是粉橙色。如果細(xì)胞大量分離和/或看起來(lái)干癟和顆粒狀/顏色深，則丟棄細(xì)胞，不要用于檢測(cè)。三、制備細(xì)胞懸浮液1.所有細(xì)胞處理和培養(yǎng)基制備應(yīng)在II類(lèi)安全柜中使用無(wú)菌技術(shù)進(jìn)行。2.當(dāng)細(xì)胞融合70-80%時(shí)...
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Toxin腸毒素的用途——作為超抗原
2024-11-27
原理：葡萄球菌腸毒素屬于超抗原，能夠非特異性激活T細(xì)胞增殖并釋放過(guò)量細(xì)胞因子，可用于抗腫瘤治療。T細(xì)胞活化通過(guò)暴露于特定抗原（例如葡萄球菌腸毒素B(SEB)）來(lái)測(cè)定。SEB是一種細(xì)菌毒素，能夠與抗原呈遞細(xì)胞(APC)和TCR上的MHCII類(lèi)分子結(jié)合，誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子的釋放，例如IL-2、IL-6、TNF-α和IFN-γ。應(yīng)用舉例：誘導(dǎo)活化T細(xì)胞一、將PBMCs（120K/孔）與Nuclight綠色試劑標(biāo)記的Ramos細(xì)胞（40/孔）進(jìn)行共培養(yǎng)。使用CD3/CD28Dynabe...
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一文了解Toxin腸毒素
2024-11-26
最近觀察到很多小伙伴都在求購(gòu)Toxin腸毒素，那么小編今天來(lái)為大家再介紹一下吧！一、公司簡(jiǎn)介T(mén)oxinTechnology,Inc.成立于1984年，專(zhuān)注于向工業(yè)與科學(xué)界提供zuo越的葡萄球菌毒素及其抗毒素。此外，該公司的服務(wù)產(chǎn)品能夠協(xié)助客戶檢測(cè)食品及培養(yǎng)上清液中葡萄球菌毒素的存在。公司的創(chuàng)始人，R.F.Reiser博士與R.H.Deibel博士，在公司成立之初便是各自領(lǐng)域內(nèi)的權(quán)wei專(zhuān)家。Reiser博士在葡萄球菌腸毒素的純化與特性鑒定方面積累了豐厚的經(jīng)驗(yàn)，并且是毒性休克綜...
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WB實(shí)驗(yàn)中如何轉(zhuǎn)膜？
2024-11-26
一、WB原理WB（WesternBlot，蛋白質(zhì)印跡法）實(shí)驗(yàn)的基本原理在于抗原與抗體之間的特異性結(jié)合特征，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)特定蛋白質(zhì)的檢測(cè)。作為分子生物學(xué)領(lǐng)域中最為常用的實(shí)驗(yàn)之一，WB涉及諸多技巧與知識(shí)，然而想要獲得令人滿意的WB檢測(cè)結(jié)果并非易事。二、WB實(shí)驗(yàn)步驟三、電泳后如何轉(zhuǎn)膜？1.準(zhǔn)備轉(zhuǎn)膜裝置：依次放入海綿、濾紙、凝膠、PVDF膜或NC膜、濾紙、海綿，注意各層之間不能有氣泡。2.轉(zhuǎn)膜：恒流200-300mA轉(zhuǎn)膜1-2小時(shí)（根據(jù)蛋白分子量和膜的類(lèi)型調(diào)整）。注：轉(zhuǎn)膜的方法WB實(shí)驗(yàn)...
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怎么解決細(xì)胞被污染的問(wèn)題？
2024-11-26
從事細(xì)胞培養(yǎng)工作時(shí)都有可能面臨細(xì)胞受到污染的境況。對(duì)于細(xì)胞的受污染問(wèn)題，最為緊要的在于防范，因?yàn)橐坏┘?xì)胞受到污染，欲挽回已十分艱難，即便成功挽回，細(xì)胞的狀態(tài)亦會(huì)受損，進(jìn)而對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響。怎么解決細(xì)胞被污染的問(wèn)題？把細(xì)胞污染分為早期污染和晚期污染兩種情況。早期污染是細(xì)胞狀態(tài)變差，但依舊能保持生長(zhǎng)，顯微鏡下未見(jiàn)明顯微生物或可見(jiàn)少量微生物。這種情況的話我們?cè)趽Q液時(shí)可以多用PBS洗幾次，然后加入適合的抗生素。早期污染只要發(fā)現(xiàn)及時(shí)，處理得當(dāng)，救回來(lái)的可能性還是很大的。晚期污染則是細(xì)...
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PCR buffer基本組分
2024-11-25
一、buffer是干什么的？PCRbuffer（緩沖液）的作用就是給Taq酶提供一個(gè)最適的反應(yīng)條件。一般含有Tris－HCL，Mgcl2+等成分。不同的pcrbuffer成分可能不一樣。二、buffer基本組分1、Tris-HCl：具有良好的緩沖能力和對(duì)多種酶的兼容性，在PCR中的主要作用是調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的pH值，使PCR反應(yīng)過(guò)程維持在一個(gè)穩(wěn)定的ph范圍內(nèi)；為酶反應(yīng)提供恒定的酸堿環(huán)境，保持酶的活性，確保PCR擴(kuò)增的順利進(jìn)行。2、K+：主要發(fā)揮穩(wěn)定酶活性和參與模板DNA的解鏈作用...
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如何降低非特異性擴(kuò)增？
2024-11-25
一、擴(kuò)增方式擴(kuò)增方式一般有兩種，對(duì)稱(chēng)擴(kuò)增和不對(duì)稱(chēng)擴(kuò)增。1、對(duì)稱(chēng)擴(kuò)增使用等量的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物量隨著PCR循環(huán)呈指數(shù)增長(zhǎng)，一般的PCR，使用的都是這種方式。由于TaqDNA聚合酶具有5’-3’外切酶活性，在PCR擴(kuò)增的過(guò)程中會(huì)水解探針，導(dǎo)致探針被耗盡，無(wú)法用于熔曲分析；若使用抗酶切修飾的探針，可一定程度降低水解，但由于探針阻礙了聚合酶通過(guò)，擴(kuò)增效率會(huì)大幅下降。對(duì)稱(chēng)擴(kuò)增產(chǎn)生的互補(bǔ)雙鏈，會(huì)與探針競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合靶序列，不利于探針結(jié)合到靶序列上，熔曲分析可能會(huì)出現(xiàn)異常。優(yōu)點(diǎn)：靈敏...
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病毒滴度的單位有哪些？
2024-11-22
一、病毒滴度病毒的滴度：?jiǎn)挝惑w積(通常為mL)液體中具有生物活性的病毒顆粒數(shù)。滴度是一個(gè)病毒自身復(fù)制的數(shù)量概念，可分為物理滴度和感染滴度。物理滴度是指包含病毒基因組的病毒顆粒的濃度，可以通過(guò)通過(guò)定量PCR對(duì)病毒顆粒的基因組拷貝數(shù)進(jìn)行檢測(cè)，也可以通過(guò)測(cè)定病毒顆粒中的特定蛋白進(jìn)行定量，但物理滴度未考慮到病毒活性和感染效率，因此是不準(zhǔn)確的。感染滴度是指成功轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的病毒顆粒的濃度，須通過(guò)細(xì)胞感染實(shí)驗(yàn)來(lái)測(cè)定，如利用定量PCR對(duì)細(xì)胞中的病毒基因拷貝數(shù)進(jìn)行檢測(cè)，或通過(guò)攜帶熒光的病毒感染細(xì)...
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