IHC染色不均勻分析

2024-11-22 上次我們分享了IHC未染色或無信號的原因分析，這次讓我們來看看IHC染色不均勻是為什么吧。一、組織切片制備解釋：組織切片薄厚不均勻→建議：更換刀片二、組織固定1.解釋：酒精固定不足會產生偽影；→建議：延長固定時間；嘗試不同的固定液2.解釋：固定延遲導致抗原擴散；建議：立即固定組織；可以考慮使用交聯固定劑三、脫蠟解釋：脫蠟不wan全→建議：使用新鮮的二甲苯四、抗體兼容性解釋：一抗可能結合其他抗原上的表位→建議：從多抗切換至單抗；嘗試不同的單抗五、透化解釋：細胞膜被破壞，膜蛋白丟...

IHC未染色或無信號原因分析

2024-11-21 IHC未染色或無信號的原因：一、?抗體問題?：抗體與一抗或二抗不兼容、抗體濃度不合適、抗體失效或儲存不當等都會導致無染色。例如，使用抗一抗種屬來源的二抗，確認二抗是否識別一抗的亞型；使用更高濃度的抗體或延長孵育時間；設置陽性對照，確保抗體仍然有效?。二、?抗原修復不足?：固定步驟可能會改變抗體識別的抗原表位，導致抗原修復不足。使用微波或壓力鍋進行抗原修復，確保使用新鮮配置的修復液?。三、?樣本處理不當?：樣本存放時間過長、切片制備不當（如脫蠟不ce底）、組織切片干片等都會影響...

蛋白芯片是什么？

2024-11-21 一、蛋白芯片簡介?蛋白芯片?是一種高通量的蛋白質功能分析檢測技術，主要用于監測蛋白質之間的相互作用。其基本原理是將各種蛋白質有序地固定于載體上，然后利用標記了特定熒光物質的抗體與芯片上的蛋白質結合，通過熒光強度分析蛋白質的表達數量和相互作用關系?。二、蛋白芯片的工作原理蛋白芯片通過將已知的蛋白質分子固定在固相載體上，然后捕獲與之特異性結合的待測蛋白質。這些待測蛋白質可能存在于血清、血漿、尿液等生物樣本中。通過洗滌和純化步驟后，利用熒光掃描儀或激光共聚掃描技術測定各點的熒光強度...

如何提取細胞核蛋白？

2024-11-20 本文介紹一下用勻漿器研磨法提取貼壁細胞核蛋白的具體操作。一、前期準備1、臺盼藍染液：取臺盼藍粉劑，將其溶解在10mL的雙蒸水當中配制成質量體積比為4%（4%w/v）的臺盼藍母液。在使用時，利用PBS緩沖液將母液稀釋10倍，使其濃度達到0.4%，之后再與細胞懸液混合均勻。2、BufferA：包含10mmol/L的HEPES（在4℃下pH值為7.9）、1.5mmol/L的氯化鎂、10mmol/L的KCL、0.5mmol/L的二硫蘇糖醇（DTT）。若擔心漿蛋白降解會對核蛋白產生影響...

細胞凋亡的檢測

2024-11-19 一、光學顯微鏡觀察凋亡細胞的主要特征為核染色質致密深染，形成致密質塊，有時可碎裂。檢測方法：細胞涂片或組織石蠟切片作HE染色或Giemsa染色，在高倍物鏡下觀察凋亡細胞的形態改變，結合顯微測量工具可作凋亡細胞計數。二、視頻時差顯微技術細胞培養中常用，通過相差顯微鏡可動態觀察細胞凋亡的變化過程，尤其是觀察細胞表和外形的變化。檢測方法：收集2×10^5細胞/ml培養的細胞，置于多孔培養板，加入凋亡誘導劑，在帶有自動攝像裝置的相差顯微鏡下觀察凋亡細胞的動態改變，每隔1分鐘作序列攝影...

PCR擴增反應中的嵌合體是什么？

2024-11-18 PCR實驗中產生的嵌合體你知道是什么呢？它怎么產生的呢？那又如何預防和處理呢？這篇文章讓我們一起了解一下吧！一、PCR嵌合體是什么PCR嵌合體(ChimericProducts)：PCR擴增反應中的嵌合體是指一個PCR產物來自兩個或多個模板分子，通常是由于延伸未完quan導致的?。這種現象通常發生在PCR反應中，特別是當使用多重PCR或復雜模板時。嵌合體會導致擴增產物中含有非預期的片段，有可能會影響實驗結果的準確性，甚至導致錯誤的解釋。二、形成原理在PCR反應中，DNA模板在...

流式細胞儀怎么分選T細胞?

2024-11-18 上文介紹了流式細胞術的原理及應用，今天讓我們學習一下怎么用流式細胞儀分選T細胞吧~一、樣本制備1.取樣:取100μL抗凝血。2.標記：根據抗體說明書標記實驗管。混勻后，室溫避光孵育15分鐘。3.溶血：將10×裂紅液用水稀釋10倍，每管加入1mL，振蕩器混勻后室溫避光靜置10分鐘，300g，4°C離心5分鐘。4.洗滌：棄去上清，加入1mL1×PBS洗液，300g離心洗滌5分鐘，洗2-3次。5.上機檢測：棄去上清后加入500μL1×PBS，混勻懸浮后過濾，避光等待上機檢測。二、儀...

流式細胞術原理及應用

2024-11-15 流式細胞儀在手，卻不知道原理？快來看看這篇文章吧！一、流式細胞術實驗原理流式細胞術（FlowCytometry,FCM）是一種單細胞定量分析技術，該技術通過測定庫爾特電阻、熒光、光散射和光吸收等參數，可以定量分析細胞的結構特征（如DNA含量、蛋白、細胞膜、胞漿或胞核抗原表達量）和功能特征（如細胞內酶活性、鈣流變化等）等多種重要參數，進行細胞特征分析與分選。它的核心功能是將混合物中的不同細胞分離并計數，將感興趣的細胞分選出來，提供分類比例并進行進一步分析。二、流式細胞技術應用1...